Método de Lowry concepto

Principio: Se basa en el desarrollo de un color azul debido a: 1) Reacción de Biuret. 2) Reducción del reactivo de fosfomolibdeno-volframato por aminoácidos como tirosima y triptófano presentes en la proteínas.

Este método ha sido modificado muchas veces. La absorbencia se mide a 750 nm (alta sensibilidad o a 500 nm (baja sensibilidad) para proteinas concentradas. Se requiere de una curva patrón que es recomendable hacer con la misma proteína. La sensibilidad va desde 0.2 µg hasta 300 µg.

Ventajas: Es el método más sensible 100 veces más sensible qu e el Biuret. Más o menos rápido(1 h)

Limitaciones: Requiere de muchos cuidados en la estandarización ya que 1) la intensidad del color varía entre proteínas. 2) El color no siempre es proporcional a la concentración. Existe interferencia de lípidos, sacarosa, amortiguadores del PH, monosacáridos y hexosaminas ya que reaccionan con los reactivos de Lowry. Los sulfatos de amonio, los sulfhidrilos y los fosfatos también interfieren en la determinación.