Principio: Las sustancias que contienen dos o más enlaces peptídicos forman un complejo púrpura-violeta con sales de cobre en soluciones al calinas. Es posible que el color se desarrolle por la formación de un ión coordinado tetracúprico con dos grupos -CO-NH-adyacentes.
Ventajas: Es el método más simple para medir la proteína total. Muy pocas interferencias de otros compuestos en el desarrollo del color.
Limitaciones: Se requiere de 20-40 mg de proteína. Existen varios pigmentos que absorben a 540mm de longitud de onda. La presencia de NH interfiere con la reacción. El color es diferente para cada proteína. Interfieren lípidos e hidratos de carbono por formación de complejos con el ion coordinado.