Cálculo de la Km y de la Vmax de un enzima concepto

La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una hipérbola. La Vmax corresponde al valor máximo al que tiende la curva experimental, y la KM corresponde a la concentración de sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad de la Vmax.

¿Qué uso tiene la Constante de Michaelis? Es una característica de una enzima (p Ej. Como el punto de ebullición de un líquido) pero nótese que varias enzimas pueden tener el mismo valor de Km Nos indica la afinidad de una enzima por el sustrato. Una enzima que tiene una Km baja tiene una alta afinidad por su sustrato, porque se satura (trabaja a su máxima velocidad) a una baja concentración del sustrato.

Las enzimas con Km baja (afinidad alta) son altamente importantes en el metabolismo: los valores bajos de Km son de orden de 1/ 1000 000 Molar= 10-6M o aun menores (10-7, ó 10-8 M). Las enzimas con Km alta (finidad menor) son menos importantes en el metabolismo: estos valores de Km son del orden de un valor= 10-2M. o aun mayores (10-1). Esto es sólo una guía burda ya que hay un espectro continuo de valores Km, pero es sin embargo una útil regla para los investigadores de enzimas.

Cuando se expresa la actividad de las enzimas en unidades internacionales, hemos visto ya que las medidas se hacen a los valores óptimos de pH y a la temperatura estándar (250C). Por razones obvias deben hacerse también a la concentración de la saturación del sustrato: la misma enzima puede dar valores diferentes si las mediciones se hicieran en parte diferentes de la curva de Michaelis.

Si un inhibidor actúa sobre la enzima, su efecto sobre la Km nos dice algo importante sobre su modo de acción. Esta ecuación da una curva hiperbólica rectangular con las siguientes características:

– El límite de la velocidad de reacción es un valor asintótico al que se aproxima la velocidad a medida que se aumenta la con-centración de sustrato.

-La constante de Michaelis, Km corresponde a aquella concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción alcanza el 50% de su valor máximo.

– En caso de un gran exceso de sustrato, las velocidades límite son directamente proporcionales a la concentración de enzima (tal como ya hemos mencionado), y como puede apreciarse de las dife-rencias de altura de las curvas y La constante Km es una medida de Ia afinidad entre una enzima y un sustrato, y por tanto, de la estabilidad del complejo enzima-sustrato. Un valor alto de Km representa poca afinidad y una asociación débil entre enzima y sustrato.

Por tanto, un sus trato que posee una constante de Michaclis baja con respecto a una enzima dada será un eficiente inhibidor competitivo de otro sustrato con un valor de Km más alto.

Hasta ahora hemos ignorado el efecto de los productos P1, P2, etc., sobre la velocidad de reacción. Obviamente, tal como sucede en cualquier reacción química, la acumulación de productos tiende a disminuir la velocidad de reacción.

La regulación de las velocidades de reacción mediante la concentración de los productos es un importante mecanismo de control en biología. Este efecto también debería de tenerse en cuenta durante el diseño de procesos tecnológicos.

Por ejemplo, la hidrólisis del principio amargo de la toronja, la naringina, por la enzima naringinasa, se ve retardada por la presencia de azúcares, los cuales son, a su vez, productos de la reacción.